Иммуноферментный анализ в ветеринарной медицине (2003)

Для успешного лечения и своевременной профилактики инфекционных заболеваний животных необходима ранняя и точная диагностика, которую возможно провести только при использовании высокочувствительных и специфических тестов. Этим требованиям отвечают серологические методы, где используют меченые флюоресцирующими красителями, изотопами или ферментами антигены и антитела.

Однако при иммунофлюоресцентном анализе определенные ограничения накладывает фактор субъективной оценки результата. При радиоиммунологическом — применяют изотопы с коротким периодом полураспада, которые потенциально опасны для здоровья. Иммуноферментный анализ (ИФА) лишен этих недостатков, поэтому является оптимальным [Тарасишин Л.А.,1986].

В 1966 г. меченые ферментами антитела использовали для определения локализации и идентификации антигенов в тканях организмов [Histochem and Cytochem,1966]. Е. Engvall et al. (1971) и В. К. Vаn Weemen et аl. (1971) описали иммуноферментный метод – ELISA – твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), обладающий идеальными характеристиками для диагностики (скорость, чувствительность, специфичность, безопасность, возможность автоматизации процесса).

ИФА имеет следующие преимущества:

— фермент-меченые антигены и антитела, сохраняемые в стерильных условиях, можно использовать для сбора пула без ощутимого снижения их ферментной и иммунологической активности [Sharma A. et al.,1982];

— метод предусматривает небольшое количество манипуляций, поэтому нет проблем контаминации, загрязнения и потери активности компонентов;

— не нуждается в дорогом оборудовании, исследования можно проводить в обычных лабораторных условиях;

— при использовании флюоресцирующих субстратов ИФА обладает огромным потенциалом, так как выявляет незначительное количество антигена и антител, например, около 10-17 г холерного токсина [Charan S. et al.,1983].

При проведении ИФА необходимо использовать стандартные компоненты. Для каждого этапа анализа надо установить определенные. параметры (концентрация, температура инкубирования, рН и др.), а также строго контролировать каждый компонент анализа.

Применение моноклональных антител для получения антисывороток повышает специфичность компонентов и позволяет преодолеть неспецифические реакции. Использование белка стафилококка в качестве заместителя специфического иммуноглобулина расширяет сферу применения ИФА и является более экономичным [Potgieter L.W.D. et al.,1980]. Различные модификации метода позволяют определять ряд антигенов или антител одновременно в одном образце. С помощью ИФА можно контролировать эффективность вакцинации, т. е. репродукцию антител и уровень иммунитета.

В настоящее время ИФА широко применяют для выявления и анализа белков практически всех вирусов и бактерий, паразитарных и грибковых болезней, гормонов, онкогенных заболеваний, токсинов, сывороточных белков человека, животных и растений, лекарств и других белков таких, как яды змей, аденозин и ДНК.

ИФА включен в число обязательных тестов экспресс-диагностики, рекомендуемых ВОЗ для обнаружения вирусов и антител к ним [Покровский В.И., Шабалина С.В.,1989], в клиниках, при эпизоотологическом обследовании в лабораториях. В ветеринарной медицинской практике ИФА также занял лидирующее положение при диагностике инфекционных болезней животных [Эрнст Л.К. и др.,1989].

Во ВНИиТИБП разработаны методы ИФА и созданы наборы для диагностики некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных. Среди них — хламидиоз, наносящий значительный ущерб сельскому хозяйству. У крупного рогатого скота, овец, свиней и птиц в зависимости от места локализации возбудителя регистрируют пневмонию, конъюнктивит, артрит, энтерит, энцефаломиелит. О хламидиозе пушных зверей в нашей стране имеются лишь единичные сообщения. Однако ученые института разработали способ очистки, концентрации хламидий и выделения мажорного белка. Это позволило получить эффективный специфический компонент для ИФА и создать высокочувствительную и специфическую тест-систему для диагностики хламидиоза пушных зверей [Моисеев А.В. 2000]. Аналогичную работу провели по созданию набора для ИФА диагностики хламидиоза овец [Белоусов В.И. и др.,1995 ].

Таким образом, ИФА позволяет выявлять вирусные и микробные антитела. Специфичность, высокая чувствительность, возможность исследования в световом и электронном микроскопах, доступность реактивов и оборудования, получение стандартных препаратов, простота и короткое время проведения анализа — все это определяет перспективность и широкое использование метода в вирусологических, микробиологических, молекулярно-биологических, иммунологических исследованиях, лабораторной работе и на практике.

А.Я. Самуйленко, Д.П. Кузнецов, С.В. Кузнецова ВНИиТИБП, Ветеринария, 2001, 12.

(Печатается с сокращениями).